最近浙江大学妇产科医院吕时铭、石一复等对妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血肿瘤细胞检测方法进行研究，由于妊娠滋养细胞肿瘤起源于妊娠时胚外层的滋养细胞，具有增生活跃和易侵入母体血循环导致早期血行转移的特点。该肿瘤特征性分泌的hCG是理想的肿瘤标志物，一直用于该肿瘤诊断、治疗监测与随访。近年来随着分子生物学技术的发展，在外周血中检出肿瘤细胞的技术得以迅速发展，但用于检测妊娠滋养细胞肿瘤尚未见报道。是否可以利用妊娠滋养细胞肿瘤细胞在分泌hCG时伴随着细胞内hCG-mRNA的表达的特点，以hCG-mRNA作为滋养细胞标志，检测进入外周血中的滋养细胞肿瘤细胞，是一个值得研究的问题，这可能有益于肿瘤转移的早期诊断。

　　1、循环血中β-hCG-mRNA检出方法的建立 荧光定量PCR融汇了PCR和DNA探针杂交技术的优点，采用荧光定量PCR技术原理为Taman技术，根据PCR反应动力学特点，能获得DNA模板的准确定量结果。实验所用引物及荧光探针均采用美国PE公司DNA荧光定量分析专用软件设计，β-hCG基因组序列参考有关文献，对JAR细胞的β-hCG-mRNA先行逆转录，而后行荧光定量PCR分析，结果表明，使用本研究所设计的β-hCG-mRNA引物与荧光探针可以检测到相当于1个JAR细胞表达的β-hCG-mRNA量，且荧光增强随着模板浓度增加而增加，从1个细胞的模板浓度到105细胞的模板浓度呈良好的线性关系，提示本研究所设计的β-hCG-mRNA引物与荧光探针以及所用的反应程式可有效地用于β-hCG-mRNA的检测，是检测β-hCG-mRNA进而推算hCG分泌细胞数量的有用方法，为研究妊娠期滋养细胞进入母体外周血的意义以及妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血中的肿瘤细胞提供了方法学基础。

　　2、妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血中检测肿瘤细胞的意义 妊娠滋养细胞疾病(肿瘤)是与妊娠相关的一组疾病，包括：葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌和胎盘部位滋养细胞肿瘤。完全性葡萄胎和部分性葡萄胎的恶变率分别为20%和5%-8%，而几乎所用的侵蚀性葡萄胎和约占50%绒毛膜癌来自于葡萄胎。因此，葡萄胎患者被要求随访。恶变者具有血行转移之特点，循环血液中存在肿瘤细胞是血行转移的基本条件之一，然而要检出循环血液中存在肿瘤细胞较难。

　　吕时铭等将已知数量的JAR细胞掺入正常外周血中，然后测定其β-hCG-mRNA的量，推算混入血液中的细胞量，并以此作为外标准，通过测定妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血中β-hCG-mRNA的量，推算患者外周血中相应肿瘤细胞的量。结果显示，尽管FQ-PCR法可以检测到相当于1个JAR细胞表达的mRNA量，但是当JAR细胞掺入外周血后再分离，只有在每10ml中超过102时方能检测到，此后随掺入JAR细胞数量的增加，FQ-PCR所需的循环数减少，呈现较好的量效线性关系，与所测得的对等数量的未掺入外周血中的JAR细胞所表达的β-hCG-mRNA的量相近，提示本研究中采用的FQ-RT-PCR能很好地定量检测hCG-mRNA，进而推算hCG分泌细胞的数量，但从母血中富集细胞的方法尚需优化。当然，作为一种实验方法尚需经特异性、灵敏度、抗干扰等多项评价，而本研究结果则为在外周血中利用细胞特异表达的hCG-mRNA检出滋养细胞进行了实验探索。另一方面也为在其他肿瘤患者外周血中检测肿瘤细胞提供了方法学的启示。

　　本研究结果虽然只在9例中4例妊娠滋养细胞肿瘤患者额外周血中检测到β-hCG-mRNA，推测这些病例外周血中存在有妊娠滋养细胞肿瘤细胞，虽然病例数所限无法从临床分期等方面分析，但已能说明用本研究方法可能是检测和证明妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血中存在肿瘤细胞的有用手段。当然其临床应用价值则需要病例的积累与动态观察。以往对滋养细胞的诊治研究的一个重要方面是有关肿瘤标记物hCG的研究，hCG是其特异与敏感的肿瘤标志物，这对于妊娠滋养细胞肿瘤的诊断与治疗观察与随访均有重要意义，但是外周血中测到hCG只能说明基因产物已分泌进入血循环，只能反映体内是否存在滋养细胞，以及滋养细胞量的多少，并不直接反映hCG分泌细胞(滋养细胞)是否已进入血液循环，而外周血中β-hCG-mRNA的检测有助于判断是否有滋养细胞存在于外周血循环中，这对更加准确的诊断和治疗妊娠滋养细胞肿瘤是一有价值的贡献。在妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血中测到β-hCG-mRNA只提示有较多的肿瘤细胞进入血循环，而这是否与患者的临床分期和WHO预后评分有关，是否与肿瘤的转移、预后有关，以及能否作为改变治疗方案或进一步治疗的指示性标志之一则需要多病例与长时间的病例跟踪与预后调查，方可得出结论。鉴于妊娠滋养细胞肿瘤的转移主要为血行转移，因此对于外周血中β-hCG-mRNA阳性者可能应较单纯hCG阳性者给予更多的关注。

HCG检测试剂盒

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